단일클론항체 하류공정의 바이러스 소거능에 관한 연구
세포주에서 추출한 생명공학 제품은 바이러스 오염 위험이 있을 수 있습니다. 그 정도는 준비 출처, 사용된 원료, 생산 시스템, 정제 시약 및 부형제를 포함한 다양한 요인에 따라 달라집니다. 제조 공정에서 바이러스의 제거 또는 불활성화를 연구하는 것은 병원성 바이러스의 의인성 전염 가능성을 줄이고 이에 따라 제품 안전에 필수적인 위험을 줄이는 핵심 단계입니다. 생물학적 제제가 임상 시험에 들어가고 시장에 출시되기 전에, 해당 생산 공정에서 알려지거나 추정되는 바이러스를 제거할 수 있는 능력이 있음이 입증되어야 합니다.
01 단일클론항체 제품 바이러스 안전성 평가
바이러스 제거 능력에 대한 연구는 일반적으로 알려진 역가 지표 바이러스를 다양한 생산 단계의 중간 제품에 추가한 다음 특정 공정으로 처리된 샘플에서 잔류 바이러스 역가를 결정하고 최종적으로 로그 감소 값(LRV)을 평가하는 방식으로 이루어집니다. 바이러스 역가의. 4log10 이상의 LRV에 대한 처리 단계는 일반적으로 효과적인 바이러스 제거 단계로 간주됩니다. LRV를 사용한 프로세스<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
모의 생산 공정(축소 공정) 방법을 사용할 경우, 가능한 한 실제 생산 공정, 특히 효과적인 생산 공정 단계와 관련된 합리적인 바이러스 제거/불활화 연구 및 테스트 계획을 설계해야 합니다. 시뮬레이션된 프로세스는 테스트 매개변수 및 제어 조건 측면에서 실제 프로세스와 엄격하게 일치해야 합니다.
02 일반적으로 바이러스 및 검증 방식을 나타냅니다.
일반적인 지표 바이러스는 표 1에 나와 있습니다.
임상시험용 신약 적용(IND) 단계에서 생명공학 제품은 최소 2가지 모델 바이러스에 대한 바이러스 제거 연구가 필요하며, 일반적으로 하나의 레트로바이러스(X-MuLV)와 하나의 파보바이러스(MMV)를 선택합니다. 생물학적 제제 허가 신청(BLA) 단계에서 바이러스 제거 연구는 일반적으로 3-5 특정/비특이적 바이러스를 사용하여 수행되며, 3-5 공정 단계는 제품이 적절한 안전 계수를 가지고 있음을 입증하기 위해 평가됩니다. 바이러스 안전 관점. 국내외 지침이 다르기 때문에 신고에 사용되는 바이러스 제거 확인 단계에 일부 차이가 있습니다. mAb 생산 공정에서 일반적으로 사용되는 바이러스 제거 검증 방식은 표 2에 나와 있습니다.
03 하류 공정의 바이러스 제거 능력
3.1 다양한 바이러스를 제거하는 다운스트림 프로세스의 능력
2009년 현재 IND 및 BLA, Protein A 친화성 크로마토그래피, Low pH, 음이온 교환 크로마토그래피 AEX(유동 침투 모드), 양이온 교환 크로마토그래피 CEX(결합 - 용출 모드) 및 바이러스 제거 검증에 대해 FDA에 제출된 단클론항체 제품 제외 바이러스 여과는 가장 일반적으로 사용되는 지표 바이러스 계열이며 제거 효과의 평균과 범위가 그림 1에 나와 있습니다.
레트로바이러스의 경우 LRV가 약 3log10인 CEX를 제외하고(그림 1의 A 막대 차트에 표시됨) 다른 프로세스는 견고했습니다(LRV가 4log10 이상). 헤르페스바이러스와 레트로바이러스는 유사한 제거 효과를 가지며 LRV > 4log10(그림 1의 B 막대 차트에 표시됨)입니다. 파보바이러스와 같이 외피가 없는 작은 바이러스는 효과적으로 제거하기가 더 어렵고, 화학적 처리에 저항성이 있으며, 필터에 쉽게 걸러지지 않습니다(그림 1의 C 막대 차트에 표시됨). AEX 및 소형 바이러스 필터만이 parvoviridae를 제거하는 데 효과적이었습니다(평균 LRV > 4log10).
그림 1에 표시된 프로세스는 ProteinA, AEX(흐름 침투 모드), CEX(동반-용리 모드), 낮은 pH 불활성화("불완전" 대" 완전 "제거) 및 크고 작은 구멍의 바이러스 제거 여과입니다.
3.2 바이러스 제거 능력에 대한 하위 공정의 영향 요인
각 공정별 LRV 값의 분포는 Figure 2와 같다. 0 ~ 21og10인 연구는 낮은 LRV 그룹으로 분류하였고, 6log10 이상인 연구는 높은 LRV 그룹으로 분류하여 비교 분석하였다.
3.2.1 ProteinA 친화성 크로마토그래피
단백질 A 공정의 LRV 값과 밸런스/세척 완충액, 필러, 용리액 조성 및 용리 pH 값 사이에는 유의미한 상관관계가 없었습니다. 낮은 LRV 그룹의 공통 분모는 공급원료가 상당히 복잡하다는 것이며 공급원료와 충전제의 복잡한 상호작용이 크로마토그래피 컬럼의 바이러스 제거 능력에 부정적인 영향을 미칠 수 있다는 것입니다.
3.2.2 AEX(플로우 스루 모드)
Strausset al. AEX 샘플의 pH와 전도도가 LRV에 영향을 미칠 수 있음을 보여주었습니다. 그러나 Miesegaes et al의 통계 결과에 따르면 ProteinA와 유사하게 AEX(흐름 침투 모드)의 LRV는 다양한 완충제, 충전제, pH 및 전도도와 유의미한 상관관계가 없는 것으로 나타났습니다. 이는 pH 및 전도도의 최적화로 인한 것일 수 있습니다. 보고된 사례의 프로세스 조건에서.
3.2.3 CEX(결합 - 용출 모드)
CEX 프로세스를 통한 바이러스 제거는 충분히 강력하지 않습니다. 높은 LRV 그룹의 LRV와 완충액, 경험 수준 또는 컬럼 높이 및 수지 유형과 같은 크로마토그래피 컬럼 특성 간에는 유의미한 상관관계가 없었습니다. 그러나 높은 LRV 연구에 사용된 평형/로딩 및 용리 pH 값은 모두 5.3±0.2로 더 낮았습니다. 낮은 LRV 그룹의 pH는 6.0±0.2였습니다. 또 다른 요인은 완충액의 염분 농도로 인해 LRV 값 차이가 발생할 수도 있다는 것입니다. 낮은 LRV 연구에 사용된 완충액은 로딩/밸런싱 용액의 평균 농도가 290±120mM이고 용리액의 평균 농도가 340±70mM인 반면, 높은 LRV 연구에서 NaCl의 농도는 58mM로 염 농도가 더 높았습니다. 각각 ±27mM 및 183±31mM입니다.
3.2.4 낮은 pH 불활성화
낮은 pH 공정에서 pH는 핵심 공정 매개변수이며 pH 3.8이면 레트로바이러스를 정도 비활성화하는 데 충분합니다. 낮은 LRV 그룹의 pH는 3.9인 반면, 높은 LRV 연구의 pH는 3.4였습니다.
3.2.5 바이러스 필터링 제거
소형 및 대형 조리개 필터 모두 MuLV 제거의 LRV 값은 2log10 이상이었고 연구의 1%만이 3log10 미만이었습니다(그림 2의 h 및 i 열에 표시됨). 구멍이 큰 바이러스 필터에 의한 레트로바이러스의 전체 제거율은 구멍이 작은 바이러스 필터에 의한 것보다 낮았습니다(그림 1의 C-막대 차트 참조). 파보바이러스 제거 결과에 영향을 미치는 주된 이유는 다양한 필터 유형 때문입니다. 일반적으로 안티 바이러스 필터링은 바이러스를 안정적으로 제거할 수 있습니다.
프로세스는 단백질 A(a), AEX 침투 모드(b), CEX 결합 - 용리 모드(c), AEX 결합 Ⅰ 용출 모드(d), 낮은 pH 불활성화("불완전" 및 "완전" 제거)(e ~ g), 큰 기공 크기(h) 및 작은 기공 크기(i ~ j) 바이러스 여과(여기서, a ~ i: 레트로바이러스, j: 파보바이러스).
04 바이러스 보안평가의 혁신과 과제
다운스트림 바이오의약품 공정 분야의 지속적인 개발과 혁신은 필연적으로 바이러스 제거 평가의 혁신을 가져올 것입니다. 연속 스트림 생물공정과 같은 업스트림 및 다운스트림 프로세스의 발전으로 인해 효과적이고 강력한 바이러스 제거 프로세스를 평가하고 확립하는 것이 필요해졌습니다. 연속 흐름 중에 바이러스 비활성화 및 바이러스 필터링과 같은 단계는 여전히 배치 모드로 수행될 것으로 예상됩니다. 연속 흐름 모드의 크로마토그래피 프로세스의 바이러스 제거 기능은 배치 처리의 바이러스 제거 기능과 크게 다르지 않지만 데이터로 뒷받침되어야 합니다.
05 전망
바이러스학적 안전성 관점에서 볼 때, 바이오제약 산업의 뛰어난 안전성은 주로 업계가 바이러스 안전성을 위한 세 가지 주요 전략, 즉 물질 및 세포 은행 공급원의 적절한 소싱 및 테스트, 바이러스 제거 평가 문서화(바이러스 검증 연구) 및 진행 중인 바이러스 검사. 새로운 세포 기질로 생산된 생물학적 약물의 특성은 다양한 위험에 따라 변할 수 있으며, 생물학적 약물의 안전성을 보장하려면 좋은 위험 관리 전략이 필요합니다. Guidling Technology는 소규모 시험, 파일럿 시험에서 대규모 생산에 이르기까지 여과 공정을 포괄하는 전문 기술 팀을 보유하고 있습니다. 당사의 멤브레인 및 멤브레인 필터는 사전 여과, 정밀 여과, 한외 여과, 나노 여과 농축, 추출 및 분리에 널리 사용됩니다. 소규모 일회용 실험실 여과부터 생산 지향 여과 시스템, 무균 테스트, 발효, 세포 배양 등에 이르기까지 당사의 다양한 제품 라인은 생산성 향상을 보장합니다.
Jiuling은 제품 품질을 첫 번째 지표로 삼아 "비용 절감, 효율성 향상"을 추구하며 앞으로 귀하와 협력하여 업계의 과제에 직면하고 더 나은 발전을 추구할 수 있기를 기대합니다.
