돼지 설사 백신의 하류 정제 공정
설사는 중국 양돈산업에 막대한 경제적 손실을 초래한 3대 질병 중 하나이다. 돼지에게 설사를 일으키는 요인은 여러 가지가 있는데 그중 바이러스 요인이 가장 심각하다. 모든 연령의 돼지, 특히 젖먹이 새끼 돼지가 감염될 수 있으며, 감염 후 사망률은 50% 이상에 달할 수 있습니다. 돼지 유행성 설사 바이러스(PEDV)와 돼지 전염성 위장염 바이러스(TGEV)는 전 세계적으로 널리 퍼져 있으며, 두 바이러스는 단독으로 또는 복합적으로 감염될 수 있습니다. 현재 PEDV와 TGEV를 치료할 수 있는 특정 약물은 없으며, 돼지 설사병의 예방 및 조절은 주로 상용백신이다.
돼지 유행성 설사병의 전통적인 백신에는 주로 전체 바이러스 불활성화 백신과 약독화 생백신이 있다. 임상적으로는 PEDV 및 TGEV 탠덤 불활성화 백신 또는 약독화 백신과 PEDV, TGEV 및 돼지 로타바이러스(RV) 삼중 불활성화 백신 또는 약독화 백신이 일반적으로 사용되며, 대부분 PEDV 및 TGEV 탠덤 백신이 사용됩니다.
현재 중국에는 돼지 유행성 설사병에 대한 백신이 많이 나와 있습니다.
불활성화 및 약독화 백신의 생산 공정은 유사하며 주로 병원체 배양, 병원체 불활성화 또는 약독화, 병원체 추출 및 정제, 백신 준비 및 포장, 백신 품질 관리의 5단계를 포함합니다. 본 글에서는 주로 병원체 정제과정을 소개한다.
설명
정화의 목적은 세포 잔해 및 기타 큰 입자 집합체를 제거하는 것입니다. 다양한 독의 세포 배양 생산에는 많은 수의 바이러스 입자가 포함되어 있을 뿐만 아니라 많은 세포 조직 잔해와 대사 산물 및 기타 불순물이 있어 독이 탁하거나 반탁한 상태가 되어 직접적으로 이 독액 농축 작업을 사용하면 곧 한외여과막이 막혀 독액의 농축을 완료할 수 없어 한외여과막 찌꺼기가 발생하게 됩니다. 따라서 독을 농축하기 전에 먼저 독을 정화해야 하는데, 이는 대개 저속 원심분리와 막여과를 통해 이루어집니다. 막 분리 기술을 사용할 때 막 재료에 전기 음성도나 소수성 그룹이 있는 경우가 많기 때문에 막 재료가 바이러스 입자에 흡착되는지 여부를 조사해야 합니다.
효율적인 정화 단계에는 높은 고체 입자 제거 용량과 높은 제품 수율, 쉬운 증폭 및 이후 다운스트림 작동 장치 보호의 조합이 필요합니다. 현재 정화 작업에는 심층 필터가 사용됩니다.
그러나 재배 규모가 너무 크면 심부 필터막이 많이 필요하게 되어 소모품 비용이 크게 증가하게 됩니다. 동시에, 세포 배양의 밀도가 높으면 심층 필터 멤브레인의 부하가 줄어들어 비용이 증가하고 제품이 과도하게 희석됩니다.
정밀여과 방식은 접선유동여과장치를 주로 사용하며, 막 구성요소는 평막카세트와 중공사이다. 접선유동여과(TFF)는 막횡단 압력차에 의해 구동됩니다. 막 공극 크기보다 작은 물질과 불순물은 막을 통과하는 반면, 입자가 큰 세포와 같은 불순물은 갇히게 됩니다. 정밀 여과에 사용되는 멤브레인의 기공 크기는 {{0}}.45/0.22μm입니다. 중공사 접선유동 정밀여과는 고밀도 세포 배양 배지와 같은 고형분 함량이 높은 액체를 직접 처리할 수 있으며, 더 적은 단계와 간단한 조작으로 원심분리 및 사전 여과 단계를 제거할 수 있으며, 세척을 통해 멤브레인을 반복적으로 사용할 수 있으며, 장비 투자를 줄이고 운영을 절감할 수 있습니다. 모듈식 자동화 생산 요구 사항에 맞춰 비용을 절감합니다.
농축 및 정제
예비적으로 밝혀진 후에도 바이러스 배양 배지에는 결함이 있는 입자, 바이러스 껍질, 세포 독소, 배지, 혈청 및 세포 조각 등을 포함하여 여전히 많은 불순물이 포함되어 있습니다. 이러한 불순물을 동물에 주입하면 효능에 영향을 미칠 뿐만 아니라 백신은 숙주의 강력한 면역반응을 일으키고, 심지어 백신을 접종한 동물의 죽음을 초래하기도 합니다. 따라서 이종단백질, 세포조각 등의 불순물을 제거하고, 효과적인 면역반응을 강화 및 유도하며, 백신 사용량을 줄이고, 이상반응을 줄이기 위해서는 농축과 정제가 필요하다.
바이러스 정제 원리: 바이러스의 생물학적 활성과 감염성을 유지하는 것을 전제로 바이러스 불순물을 제거하고 바이러스의 순도를 높인다.
현재 대규모 생산에 사용되는 주요 농축 및 정제 방법은 한외 여과입니다.
한외여과 방법은 주로 접선 흐름 한외여과 장치, 중공사 여과 시스템 및 기타 여과 장비를 사용하며, 정상적인 상황에서 한외여과 방법을 적용하면 바이러스를 100배 이상 농축할 수 있고 이종단백질 제거율은 최대 99%까지 가능합니다. 그 중 중공사막 여과 기술은 전단력이 약하고 낮으며, 막힘이 용이하고, 작동이 유연하며, 수명이 길고 비용이 저렴하며 증폭이 용이하다는 장점이 있으므로 바이러스 농축 및 정제를 위해 중공사막을 선택하는 것이 좋습니다.
농축 및 정제를 위해 한외여과법을 사용하는 경우, 적절한 막 공극 크기를 선택하는 것이 매우 중요하며, 이는 농축의 효율성과 품질을 직접적으로 결정합니다. 한편으로는 수율을 보장하기 위해 표적 분자를 효과적으로 트랩할 수 있는 막 구멍을 선택해야 하며, 다른 한편으로는 이종단백질의 제거 효과와 처리 속도를 충분히 고려해야 합니다. 따라서 가장 좋은 원리는 표적 분자를 포집할 수 있는 기공 크기가 가장 큰 막을 선택하고, 기공 크기 분포가 균일한 필터막을 선택하도록 노력하는 것입니다.
돼지 전염병 설사 바이러스(PEDV)와 전염성 위장염 바이러스(TGEV)는 모두 직경이 60~190nm인 거꾸로 된 스파이크 모양의 스파이크가 있는 다형성 구체인 코로나바이러스입니다. 로타바이러스병은 로타바이러스(RV)가 바퀴 모양을 하고 직경이 약 70nm인 인수공통전염병이다. 이 세 가지 바이러스는 일반적으로 100-750kd 조리개 한외여과막을 사용하여 차단할 수 있습니다.
Guidling Technology는 바이오 의약품, 세포 배양, 바이오 의약품의 정제 및 농축, 진단 및 산업용 유체에 중점을 둔 국가 첨단 기술 기업입니다. 우리는 원심분리 필터 장치, 한외여과 및 정밀여과 카세트, 바이러스 필터, TFF 시스템, 심층 필터, 중공 섬유 등을 성공적으로 개발했습니다. 이는 바이오 의약품, 세포 배양 등의 응용 시나리오를 완벽하게 충족합니다. 당사의 멤브레인 및 멤브레인 필터는 사전 여과, 미세 여과, 한외 여과 및 나노 여과의 농축, 추출 및 분리에 널리 사용됩니다. 소규모 일회용 실험실 여과부터 생산 여과 시스템, 무균 테스트, 발효, 세포 배양 등에 이르기까지 당사의 다양한 제품 라인은 테스트 및 생산 요구 사항을 충족합니다. Guidling Technology는 귀하와 협력하기를 기대하고 있습니다!
