원심 필터 장치에 대한 FAQ
Q1. 분자량이 다른 단백질을 분리해야 하는데, 단백질의 분자량은 어느 정도의 차이가 있어야 할까요?
A:두 단백질의 크기는 10배 이상 차이가 나야 합니다.
Q2. 캔 원심 분리기알필터 장치는 멸균되고 알칼리 세척에 강합니까?
A: 75% 에탄올 수용액으로 살균이 가능하며 멤브레인은 0.1-0.5N 수산화나트륨 알칼리 세척에 견딜 수 있습니다.
Q3. 농축 중에 단백질이 침전되면 어떻게 처리합니까?
A: 단백질이 너무 빨리 농축되거나 너무 농축되면 단백질 침전이 발생할 수 있으며 농축 후 단백질의 최종 농도가 너무 높아서는 안 됩니다. 농축 속도에 민감하고 침전되는 경향이 있는 단백질, 제안된 개선 방법:
원심 속도를 줄입니다.
차단 분자량이 더 높은 한외여과막 사용
농축된 튜브를 불어서 빨아들인 후 원심분리기
Q4. 가능한 이유는 무엇입니까원심 필터 장치원심분리할 수 없습니까?
A: 한외여과막이 완전히 건조되어 있고, 막의 표면이 약하게 소수성이며, 낮은 투과율로 침투 후 플럭스를 회복할 수 있기 때문에 한외여과관을 원심분리할 수 없는 경우 초기 원심분리를 위해 20% 에탄올 수용액을 사용할 수 있습니다. 표면 장력 용매.
Q5. 원심 필터 장치의 올바른 사용 방법 및 보관
A: 원심 필터 장치는 무결성을 확인하기 위해 사용하기 전에 정제수로 원심 분리해야 합니다. 매번 사용한 후에는 멤브레인이 마르지 않도록 젖은 상태로 보관해야 합니다.
Q6. 원심 필터 장치는 내독소를 어떻게 제거합니까?
A: 저희가 제공한 원심여과장치는 엔도톡신 처리가 되어 있지 않으며, 엔도톡신은 자연계에 널리 존재하기 때문에 엔도톡신이 필요한 시료는 실험 전에 0.5N 수산화나트륨으로 전세정한 후, 대부분의 내독소를 제거하는 RO 물.
Q7. 농축된 단백질을 다운스트림 분석에 사용할 때 간섭이 있는 것으로 나타났습니다. 그 이유는 무엇입니까?
A: 원심 필터 장치는 완충액 또는 정제수로 미리 세척할 수 있습니다. 그래도 간섭이 있으면 0.1N 수산화나트륨으로 씻은 다음 정제수로 씻는다.
Q8. It는 농축 후 농축물에 표적 단백질이 없음을 발견하였다. 가능한 이유는 무엇입니까?
A: 1) 단백질의 초기 농도는 너무 낮지 않아야 하며, 농도가 너무 낮으면 멤브레인이 유지되지 않을 수 있습니다.
2)적절한 멤브레인 기공 크기를 선택합니다. 여과관의 원심분리 농도는 막다른 여과에 속하며 막 구멍 크기는 일반적으로 표적 단백질의 2배 미만이거나 그 이상입니다.
3) 올바른 원심 속도를 선택하십시오.
4) 목적 단백질의 침전 여부
Q9. 원심 필터 장치의 패시베이션 처리
A: 원심여과장치 표면의 패시베이션 전처리는 멤브레인 표면의 단백질 흡착 손실을 줄일 수 있으며, 대부분의 경우 희석된 단백질 용액을 농축하기 전에 컬럼을 전처리하면 회수율을 향상시킬 수 있습니다. 막과 표면의 단백질 흡착 부위를 비우고 부동태화 방법은 컬럼을 고용량의 부동태화 용액에 1시간 이상 미리 담근 후 컬럼을 증류수로 완전히 플러싱한 다음 컬럼을 증류수로 1회 원심분리하는 것입니다. 막에 남을 수 있는 패시베이션 용액을 완전히 제거하려면 패시베이션 후 막이 마르지 않도록 주의하고, 나중에 사용하기 위해 보관하려면 멸균 증류수를 추가하여 막을 젖게 유지해야 합니다., 문의하시기 바랍니다. 일반적인 패시베이션 솔루션을 위한 당사 엔지니어.
Q10. 한외여과막은 분자를 계층적으로 필터링합니까?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >100kd 한외여과막을 사용하면 95% 그러나 막의 기공 크기보다 작은 분자는 자유롭게 막을 완전히 통과하지 못한다. 67kd의 분자 유지율은 70% 이상이며, 43kd의 단백질도 40% 이상 차단되어 있어, 혼합 용액의 여러 성분이 단일 성분 용액처럼 단순하고 용이하지 않은 막을 통과하며, 실제로는 , 두 개의 거대 분자를 분리하려면 이들 사이의 분자량 차이가 8배 이상이어야 합니다.
Q11. 한외여과를 통해 대분자와 소분자를 효과적으로 분리하는 방법은 무엇입니까?
A: 프로세스의 필요로 인해 거대 분자의 불순물이 제거되거나 거대 분자에서 작은 분자가 제거됩니다. 이는 정상적인 생산 과정입니다. 적절한 멤브레인 공극 크기, 여과 방법 및 작동 조건을 선택하는 것이 매우 필요합니다. 일반적으로 막의 MWCO 사양이 두 단백질 사이에서 선택되면 비교적 이상적인 분리가 이루어질 수 있습니다. 단백질 용액이 상대적으로 희석된 경우 낮은 압력에서 작동하면 더 나은 결과를 얻는 데 도움이 됩니다. 접선 흐름 여과를 선택하고 더 나은 분리 효과를 얻으려면 다중 투석 여과를 수행하십시오.
